?ApH7.6以上のbuffer条件では、細胞接着抑制活性は認められない。

?BHKaの最も強い細胞接着抑制条件はHKaがsurfaceに作用する事であった。

（4）HKaの細胞接着抑制の作用機序およびそのdomainの同定

以上に示した結果により細胞接着抑制domainは軽鎖のhistidine rich domain（HRD）に存在することが強く示唆された。さらにどのdomainが重要であるかを検討するためPET3a vectorを用いてヒトHKaのcDNAよりHRDをexpressionした。図3にそのHRDをexpressionしているBacteria（clone15−1株）を得た（A）。図3（B）はHRDを認識するMAb’sによるimmunoblottingである。このbacteria lysateからCM−sepharoseを用いHRDを精製し（recombinant proteinr−HRD、rF1F2）、細胞接着実験を行なった。図4では（0.01−3μg/ml）のVNをプレートにコートし、100nMに相当する蛋白質をMG63cellsと同時に加え1時間後の細胞接着を検討した。興味のあることには強い細胞接着抑制活性を示すためにはwhole moleculeが必要であり軽鎖＞rHRDの順で作用が弱まっていった。VN（1μ9/ml）をコートしたプレートでのMG63cellsの接着は100nMのrHRDでは阻害しなかったが、VN（0.3μ9/ml）では50%阻害していた。以上よりVN（0.3μg/ml）をコートした条件でrHRDの阻害作用について濃度依存性を検討した。rHRDは弱いながらもVN−依存性細胞接着を阻害した。さらにrHRDがHKaの作用を阻害するかどうか検討した。図5にはVN（1μg/ml）をコートしたプレートヘのMG63cellsの細胞伸展を100%とした時のHKa、rHRD、LKの作用をみたものである。HKaを加えると細胞は伸展しない（B）。しか

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